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技術知識

如何更好的使用色譜柱

發布時間: 2019-01-21 14:37   4545 次瀏覽

1、拿到色譜柱后先閱讀說明書,了解色譜柱的具體性能:耐受溫度、耐受PH等。以及色譜柱的沖洗和保存條件。經過柱校測試確認色譜柱本身沒有問題后方可正常使用。


2、樣品充分前處理,確保樣品的潔凈;使用保護柱或在線過濾器,根據實際情況更換保護柱芯或濾片。


3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。


4、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中如果流動相中使用了緩沖鹽,避免出現鹽析。



5、選擇使用適宜的流動相(尤其是PH),以避免固定相被破壞,PH過低共價鍵斷裂,鍵和相水解;PH過高硅膠溶解。


6、色譜柱使用過程中,如果壓力升高,或出現污染,選擇適當的條件沖洗或反沖。

 

適用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱體積的含有≥30%誰的極性郵寄溶劑(如乙腈)作為流動相除去柱子中的緩沖鹽;使用至少20倍柱體積的含有95%極性郵寄溶劑(如乙腈)沖洗色譜柱。


污染物的去除常規星期后柱校沒有明顯恢復時,使用50%異丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱體積以除去污染物。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定,此方法僅為賽分針對自己品牌的反相色譜柱沖洗的參考意見)


適用于氨基柱、氰基柱

常規清洗:乙腈:水=60:40條件對色譜柱進行沖洗,清洗時不建議水相比例超過40%,過高使用水相容易導致鍵和相水解。


色譜柱再生:當色譜柱經過長期使用,柱校降低時,可以對色譜柱進行再生,乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30倍柱體積。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定,此方法僅為賽分針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)

 

適用于離子交換柱SCX、SAX沖洗方法

日常沖洗:用****水沖洗30個柱體積除鹽,然后用20%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在20%甲醇或乙腈中。


長期保存:用****水沖洗30個柱體積去除鹽,然后用50%乙腈;50%水沖洗20個柱體積后保存在50%乙腈:50%水中。


再生:先用高濃度的緩沖鹽(不超過1M),然后再用****水洗,****乙腈或甲醇沖洗,再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定,此方法僅為賽分針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)



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